Dihidromiricetino pagrindai

Dihidromiricetinas yra stiprus dihidropirimidazės inhibitorius, kurio IC50 yra 48 μM. Dihidromiricetinas aktyvina autofagiją slopindamas mTOR signalizaciją. Dihidromiricetinas slopina mTOR komplekso (mTORC1/2) susidarymą.

Tikslas: Dihidropirimidinazė: 48 μM (IC50);mTORC1;mTORC2;Autofagija

Tyrimai in vitro: Dihidromiricetinas, flavonolis, reikšmingai slopina dihidropirimidazės katalizinį aktyvumą.natūralus substratas dihidrouracilas ir ksenobiotinis substratas 5-propilhidantoinas. Dihidromiricetinas parodė reikšmingą slopinamąjį poveikį dihidropirimidazės aktyvumui abiejuose substratuose, net labiau nei miricetinas. Dihidropirimidazės dihidromiricetino IC50 reikšmės, nustatytos naudojant dihidrouracilo ir 5-propilhidantoino titravimo kreives, buvo atitinkamai 48±2 ir 40±2 μM[1]. Dihidromiricetino (DHM) papildymas reikšmingai pakeitė mTOR fosforilinimo padidėjimą Ser2448 (p-mTOR) vartojant D-gal, o tai rodo, kad dihidromiricetinas gali suaktyvinti autofagiją, slopindamas mTOR signalizaciją.

In vivo tyrimas: normali kontrolinė grupė, D-gal grupė, D-gal ir dihidromiricetino (100 mg/kg) grupė, D-gal ir dihidromiricetino (200 mg/kg) grupė buvo įvertinti Morriso vandens labirintu (MWM). žiurkių gebėjimas mokytis ir atmintis) (n=10 grupėje). Gydymas dihidromiricetinu (DHM) žymiai sutrumpina pabėgimo delsą, palyginti su D-gal sukelta modelio grupe.

Tirpumas: In vitro: DMSO: Didesnis arba lygus 100 mg/mL (312,26 mM)," Didesnis arba lygus " reiškia tirpus, bet prisotinimas nežinomas. In vivo: 1. Įpilkite kiekvieną tirpiklį po vieną: 10 procentų DMSO 90 procentų (20 procentų SBE- -CD fiziologiniame tirpale) Tirpumas: didesnis arba lygus 2,5 mg/mL (7,81 mM); skaidrus tirpalas 2. Įpilkite kiekvieną tirpiklį po vieną: 10 procentų DMSO 40 procentų PEG300 5 procentų Tween-80 45 procentų fiziologinio tirpalo Tirpumas: didesnis arba lygus 2,5 mg/mL (7,81 mM); Skaidrus tirpalas 3. Įpilkite kiekvieną tirpiklį po vieną: 10 procentų DMSO 90 procentų kukurūzų aliejaus Tirpumas: didesnis arba lygus 2,5 mg/mL (7,81 mM); skaidrus tirpalas.

Atsarginis sprendimas:

1 mM 3,1226 ml 15,6128 ml 31,2256 ml

5 mM 0.6245 ml 3.1226 ml 6.2451 ml

10 mM 0,3123 ml 1,5613 ml 3,1226 ml

Kinazės tyrimas: greitieji spektrofotometriniai tyrimai naudojami hidantoinazės, alantoinazės, dihidrotirozinazės ir iminazės fermentiniam aktyvumui nustatyti. Kaip substratai buvo naudojami dihidrouracilas, {{0}}propilhidantoinas ir ftalimidas. Jei aiškiai nenurodyta kitaip, standartiniame dihidropirimidazės tyrime kaip substratas buvo naudojamas dihidrouracilas (2 mM). Trumpai tariant, absorbcijos sumažėjimas ties 23{17}}, 248 ir 298 nm buvo išmatuotas atitinkamai hidrolizavus dihidrouracilą, 5-propilhidantoiną ir ftalimidą kaip substratus 25 laipsnių kampu. Reakcijai pradėti, išgryninta dihidropirimidazė (10-70 ug) buvo pridėta į 2 ml tirpalo, kuriame yra substrato ir 1 00 mM Tris-HCl (pH 8.{36}}). ). Substrato hidrolizė buvo stebima UV/vis spektrofotometru. Kiekvieno substrato ekstinkcijos koeficientas buvo eksperimentiškai nustatytas tiesioginiu matavimu spektrofotometru. Dihidrouracilo, 5-propilhidantoino ir ftalimido ekstinkcijos koeficientai yra 0,683 mM-1 cm-1 esant 230 nm, 0,0538 mM-1 cm-1 esant 248 nm , ir 0,0538 mM-1 cm-1 esant 298 nm, atitinkamai, esant 3,12 mM-1 cm-1. Pradinis pokyčio greitis buvo fermento koncentracijos funkcija absorbcijos intervale 0.01-0.18 min-1. Aktyvumo vienetas apibrėžiamas kaip fermento kiekis, katalizuojantis 1 hidrolizę. μmol substrato per minutę, o specifinis aktyvumas išreiškiamas aktyvumo vienetais vienam mg fermento. Kinetiniai parametrai Km ir Vmax buvo nustatyti iš netiesinių grafikų, pritaikant atskirų eksperimentų hidrolizės greitį prie Michaelis-Menten lygties.

Ląstelių eksperimentai: Hipokampo ir žievės audinių mėginiai buvo lizuojami lizės buferyje, kuriame yra 20 mM Tris (pH 7,5), 135 mM NaCl, 2 mM EDTA, 2 mM DTT, 25 mM glicerofosfato, 2 mM natrio glicerolio, 10 proc. Triton X homogenizuoti. -100, 1 mM natrio ortovanadato, 10 mM NaF, 10 ug/mL aprotinino, 10 ug/mL leupeptino ir 1 mM PMSF ant ledo 30 min. ir centrifuguojama 12000 xg, 4 laipsniais 30 min. Supernatantas buvo surinktas ir baltymų kiekybinis nustatymas buvo atliktas naudojant BCA rinkinį. Baltymų mėginiai buvo virinami 5 minutes 95 laipsnių temperatūroje, esant mėginio buferiui. Tiksliniai baltymai buvo atskirti natrio dodecilsulfato poliakrilamido gelio elektroforeze (SDS-PAGE), perkelti į nitroceliuliozės membranas ir zonduoti atitinkamais pirminiais ir antriniais antikūnais. Galiausiai vizualizuokite tikslinį baltymą paveikdami rentgeno plėvelę sustiprintos chemiliuminescencijos (ECL) reagentais.

Eksperimentai su gyvūnais: Žiurkės Buvo panaudota 40 Sprague-Dawley (SD) žiurkių patinų (amžius: 8 sav.; kūno svoris: 160±20 g). Žiurkės buvo atsitiktinai suskirstytos į 4 grupes, įskaitant normalią kontrolinę grupę, D-gal modelio grupę ir D-gal kartu su DHM, kurių dozės buvo atitinkamai 100 ir 200 mg/kg-d, kiekvienoje po 10 žiurkių. grupė. Visos žiurkės buvo laikomos aplinkoje, kurioje kambario temperatūra buvo 22 ± 2 laipsniai ir tamsus fotoperiodas (12 val.:12 val.), Su maistu ir vandeniu ad libitum. Po 1 savaitės pripratimo prie naujos aplinkos, DHM grupės žiurkėms 6 savaites iš eilės buvo duodamos nurodytos DHM dozės, ištirpintos distiliuotame vandenyje, vieną kartą per dieną 8:00 val. Įprastos kontrolinės grupės žiurkėms buvo duodama distiliuoto vandens. Išskyrus normalią kontrolinę grupę, kitų grupių žiurkėms po oda buvo švirkščiama D-gal 150 mg/kg.d dozė 6 savaites iš eilės. Kiekvienas DHM turi būti sušvirkštas likus 2 valandoms iki D-gal injekcijos.

Pristatymas: kambario temperatūra; gali skirtis

98 proc

1.Greitas pristatymas.Kokybės užtikrinimas

2.Mūsų mokslinių tyrimų ir plėtros komandą sudaro doktorantūros studijas baigę, biologijos ir maisto srities absolventai, turintys nepriklausomų tyrimų ir plėtros galimybių.

3. Pateikite pritaikytą pakavimo paslaugą. OEM paslaugą, įskaitant: minkštą gelį, kapsulę, tabletę, paketėlį, granules ir kt. Paslauga, skirta gaminti klientams skirtus produktus su daugiau nei 100 klientų visame pasaulyje.

4. Daugiau nei 10 metų patirtis gaminant žoleles pagal GMP standartą. Visa patirtis vaistažolių ekstraktų kokybės kontrolės ir taikymo srityje.